动物

从5周，10周，20周和30周龄C57BL / 6 N小鼠解剖肾脏，肝脏和脾脏。对于肾脏和脾脏，使用每种性别和年龄的2只小鼠。对于肝脏，使用每种性别和年龄的2至4只小鼠。对于子宫，使用了八只小鼠，所有这些小鼠都在100天左右。这些实验得到了当地动物护理委员会（LAGeSo，德国柏林）和马克斯·德尔布吕克分子医学中心（MDC）动物福利官员的批准（编号X 9011/19）。

基质水凝胶

具有不同刚度的水凝胶（1 kPa，2 kPa，4 kPa，8 kPa，12 kPa和25 kPa）从Softwell，Matrigen，Matrigen Life Technologies，Brea，CA购买，用于质量控制（1 kPa，2 kPa，4 kPa，8 kPa，12 kPa和25 kPa;N = 1 到 3）。

组织制备

左肾和右肾分别从侧中线分为两个（图）。3A），四个部分全部缩进。肝脏样本取自左叶（图）。四A）. 整个收获脾脏用于实验（图）。4选择并打开左子宫角（图）。5答，B）。所有器官都经过清洁，去除器官表面可见的血液，脂肪，膜或血管，但避免损坏它们的实质。为了获得平坦的表面，我们将所有样品粘贴到直径为6厘米的培养皿底部，并用虫胶（Sigma）使外表面平整。将组织样品浸入PBS（NaCl 4.0 M，KCl 137.0 M，Na2高原油40.01 米，千米2采购订单40.0018米;酸碱度 7.4）。

纳米压痕

为了确定弹性特性，我们使用了位移控制的纳米压痕仪（Piuma;光学11，荷兰阿姆斯特丹）。该设备采用套圈顶部悬臂探头32，33施加负载并使用基于光纤的读数同时测量压痕深度（图）。1A）. 我们使用半径为 50 μm 且悬臂刚度为 0.5 N/m 的球形探头。在每一系列实验之前，通过压入刚性表面并将悬臂弯曲等同于探头位移来进行悬臂弯曲校准。之后，将探针聚焦在组织表面的适当区域（图。1B、3A、4A、5A、6B）。在25×5 μm网格扫描中，将每个凝胶压痕5次（800×800个基质），测量间隔距离为200 μm。肾脏、肝脏和脾脏样品在9××3μm网格扫描中用3个压痕（200个基质）压进（图。200B、3B、4B）。在子宫中，分别在子宫的近端、中部和远端测试了 5 × 4 μm 网格中具有 100 个单压痕的三个压痕矩阵（图）。100B，C）。应用的压痕方案由在6 nm压痕深度下4 s的加载阶段（保持8000秒）和卸载阶段4 s组成。所有扫描都进行了两次，以分析可靠性。左右肾四个部分所有结果的平均值表示为肾脏弹性。凝胶、肝脏和脾脏的硬度表示为每次扫描中所有结果的平均值。三次扫描结果的平均值作为子宫硬度。所有单个压痕值均由 Piuma Dataviewer 版本 2.2 （Piuma;光学11，荷兰阿姆斯特丹）。