快速TA克隆的突破 T
目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：
方法 1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara，
可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到promega、takara的阳性率和稳定性。
方法2、以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法，最早采用这种连接方法的是INVITROGEN（英俊公司），并且申请了**，这种方法的优势是快速连接，在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，阳性率比较高，这种方法国内也有人模仿，照理说，这种载体能迅速的替代promega、takara，但是为什么promega、takara的载体销售还是主流呢？那就要说一下拓扑异构酶这种连接方法的缺点：
1、长片段的连接效率很低，大于1.5K的片段用这种方法连接效率很低；
2、转化子少，虽然阳性率高，但是转化子少；
3、稳定性比较差，拓扑异构酶对温度很敏感，运输的温度和连接的温度都会影响，用水浴锅控制连接温度因为温度误差比较大就很难连接，必须用PCR仪；
4、经常会测序无信号，从测序公司的反馈，这种载体经常会导致T7启动子丢失，测序无信号，必须换引物才能测序。
这两种方法各有优缺点，有没有一种T载体能够兼备两种方法的优点，而克服两种方法的缺点呢？一直致力于生物技术原创技术开发的百泰克公司新近推出的PUM-T载体兼具两种方法的优点，不仅提高了连接效率和阳性率，而且连接时间仅仅需要10-15分钟，即使难以连接的长片段DNA（1.5K以上）的连接效率也远远超过TOPO克隆的方法，极大的方便了生物科研工作者的研究，节约了时间提高了效率！工欲善其事，必先利其器！磨刀不误砍柴工！我们期待更多的致力于技术原创的生物公司能够带来更多方便的产品，更多国内的生物技术公司能够逐渐占领生物技术的高地，在给我们带来方便的同时，也降低了整个行业的科研成本，让我们科研工作者有限的资金能发挥更大作用，做更多的研究，为生物技术的发展做出更多的贡献！