产品信息


 

  

  
产品名称
  
  

  
产品编号
  
  

  
规格
  
  

  
储存
  
  

  
价格
  
 
 

  

  
Yefluor 647 EdU Kits (植物细胞)
  
Yefluor 647 EdU 植物细胞染色试剂盒
  
  

  
40288ES60
  
  

  
100 T
  
  

  
-20℃避光保存
  
  

  
1583.00
  
 


产品描述

植物细胞含细胞壁，采用BrdU抗体检测方法通常需要消化植物细胞细胞壁，这易带来一些杂质干扰，甚至破坏重要的细胞形态表征，导致检测的可靠性大大降低。EdU和Yefluor系列染料分子均很小能够轻松地透过细胞壁屏障，因而无需消化细胞壁即可完成检测。而且该方法无需DNA变性、抗原修复、抗原抗体反应即可准确地检测植物生长，发育，分化等性状的细胞增殖情况，使用更加方便、快速、灵敏。本试剂盒中EdU试剂含有炔烃，而Yefluor 647 Azide染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，使用方便。

光谱特性：Yefluor 647 Azide：Ex/Em=650/670 nm；Hoechst 33342: Ex/Em=350/461 nm,bound to DNA。

产品组分


 

  

  
编号
  
  

  
组分名称   
  
  

  
产品编号/规格
  
 
 

  

  
40288ES60（100T）
  
  

  
保存条件
  
 
 

  

  
40288-A
  
  

  
10
  mM EdU
  
  
  

  
0.2 mL
  
  
  

  
-20℃
  
  
 
 

  

  
40288-B
  
  
  

  
Yefluor
  647 Azide
  
  
  

  
20 μL
  
  
  

  
-20℃，避光
  
  
 
 

  

  
40288-C
  
  
  

  
10×
  Click-iT EdU 反应缓冲液
  
  
  

  
1 mL
  
  
  

  
2-8℃
  
  
 
 

  

  
40288-D
  
  
  

  
CuSO4
  
  
  

  
0.5 mL
  
  
  

  
2-8℃
  
  
 
 

  

  
40288-E
  
  
  

  
Click-iT
  EdU 缓冲液添加物
  
  
  

  
30 mg
  
  
  

  
2-8℃
  
  
 
 

  

  
40288-F
  
  
  

  
Hoechst
  33342
  
  
  

  
25 μL
  
  
  

  
2-8℃
  
  
 




注：上述反应次数是针对96孔板培养的细胞计算。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20℃避光保存，1年有效。 

注意事项

操作时请采取防护措施，穿防护服、戴一次性手套等。

使用方法

1、EdU标记细胞

1.1 按每孔4×103-1×105个细胞接种于96孔板中，按照实验设计进行所需要的药物处理或者其他刺激处理。

1.2 准备一份2× 的EdU工作液（组分A）：以完全培养基稀释10 mM的储液至合适的工作浓度。推荐以10 μM的初始工作浓度开始预实验。

1.3 预热2× 的EdU工作液，加入等体积的培养基使浓度变为1× (如：需要得到10 μM的终浓度，应以新鲜培养基等体积加入到20 μM的EdU工作液中)。

1.4 合适时间合适条件孵育细胞，EdU孵育细胞的时间可以直接用作测定细胞DNA合成的指标，时间点选择以及孵育时间的长度取决于细胞生长速率。通过短暂的EdU孵育进行的脉冲式标记细胞可以用于研究细胞周期动力学。

注意：EdU的标记浓度应根据所用的细胞类型做相应的优化选择，推荐客户以10 μM的EdU初始浓度进行摸索。细胞培养基、细胞生长密度及细胞类型和其他实验条件都有可能影响细胞的标记效果。预实验中，我们建议客户设置一系列的EdU浓度梯度，以确定最佳的合适您的细胞的实验浓度。

2、细胞固定及促渗操作

2.1 孵育完成后，去除培养基加入50 μL
4%中性多聚甲醛至各个孔，室温孵育15-30 min后，去除固定液。

2.2 每孔加入50 μL
2 mg/mL 甘氨酸溶液，室温孵育5min，中和残留的固定液。

2.3 按每孔0.1 mL
3% BSA in PBS的洗涤液洗涤细胞2次。

2.4 去除洗涤液，加入0.1 mL
0.5% Triton X-100 in PBS到每个孔中，室温孵育20 min。

注意：本参考步骤是针对以4%中性多聚甲醛固定且以0.5%
Triton X-100促渗操作样本而优化的操作方法，但本参考所介绍的步骤同样可用于其他类似操作的样本，如以甲醇固定以皂苷固定的样本等。

3、EdU检测

注意：本参考步骤每孔反应使用100 μL的Click-iT反应混合物。用户可根据自己的样本情况调整等比例减少所用的溶液体积。

3.1 准备1×
Click-iT EdU 反应缓冲液（组分C）：10× 组分C试剂以去离子水稀释TUNEology 波长可调检测卡盒-->