Heparin Sepharose 6FF 的预装柱说明书
货号：YA2491
规格：1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL
保存：2-8℃
产品说明：
    Heparin Sepharose 6FF 是一种用于纯化肝素依赖性生物分子的亲和层析介质，包括抗凝血酶
III、凝血因子和其他血浆蛋白、DNA 结合蛋白、脂蛋白、蛋白合成因子、核酸作用酶和类固醇受体。
Heparin Sepharose 6FF 采用高交联的 6%琼脂糖介质，可耐受较高的流速及化学稳定性，适合大规
模纯化。
表 1：介质性能参数


纯化流程： 1、Buffer 的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液: 10-100mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，pH7.4
洗脱液: 10-100mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，1M NaCl，pH7.4
注: 平衡液和洗脱液可根据样品性质进行适当改变，原则是低盐上样高盐洗脱。
2、样品准备
样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止
堵塞柱子。
3、样品纯化
1) 上柱：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，
将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2) 水洗：用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
3) 平衡：使用至少 5 倍柱体积的平衡液平衡色谱柱。
4) 利用泵或样品环上样。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱
子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5) 洗杂：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积）。
6) 洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

7)水洗：依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用 5 倍柱体积
的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被细菌污染。
4、SDS-PAGE 检测
将纯化过程中收集的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE
检测纯化效果。
填料清洗
Heparin Beads 6FF 纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和
蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法
用 2 倍柱体积的 0.1M NaOH 或 6M 盐酸胍或 8M 尿素溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的
PBS，pH 7.4 清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的
PBS，pH 7.4 清洗。 去除一些离子键结合物质
用 3-4 倍柱体积的 2M NaCl 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS， pH 7.4 清洗。