ADPG焦磷酸化酶测定试剂盒-酶-试剂-生物在线

产品名称： ADPG焦磷酸化酶测定试剂盒

英文名称： ADPG Pyrophosphorylase （AGP）Assay Kit

产品编号： BC0430

产品价格： 0

产品产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标： Solarbio

更新时间： 2023-08-11T10:26:26

使用范围： null

北京索莱宝科技有限公司

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ADPG焦磷酸化酶测定试剂盒产品内容：

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存;

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入4mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入500μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃保存；

试剂五：液体250μL×1支，-20℃保存。

产品说明：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G1P）与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

ADPG焦磷酸化酶测定试剂盒操作步骤：

一、粗酶液制备

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2）

混匀，30℃保温15 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却。试剂一、试剂三置37℃保温10min以上。

混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

三、ADPG焦磷酸化酶测定试剂盒AGP活性计算

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。

AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷ε÷d×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=2854×ΔA÷Cpr。

此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

AGP活性（U/g 鲜重）＝ΔA÷ε÷d×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=2854×ΔA÷W。

T：反应时间，2min；ε：NADPH消光系数，6.22×10^-3mL_˙nmol^-1_˙cm^-1；V反总：反应总体积，0.71mL；d:石英比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.02mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。